实验室手册-第12章

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２、 以4℃或…20丙酮固定涂膜，室温10—15分钟，晾干。
３、 加染荧光抗体（FITC标记兔抗菌素沙门氏菌血清或O　抗菌素原单抗），37℃45分钟。
４、 PBS　　PH7。4　　0。01M搅拌下洗涤10分钟；晾干。
５、 于荧光镜下镜检，阳性样品在细菌四周有特异性黄绿色荧光，而阴性样品未见黄绿色荧光。
（二） 单抗夹心ELISA试验检测沙门氏菌
１、以方阵试验确定单抗包被浓度和酶标制剂的使用浓度。
２、以pH9。6碳酸盐缓冲液包被单抗，100ul/孔，4℃过夜，或37℃2hr。
３、PBST洗涤三次。
４、以10％CFS…PBS封闭37℃3hr。
５、PBST洗涤三次。
６、加模拟样品增菌液，100ul/孔；室温15分钟。
７、PBST洗涤三次。
８、加新配套OPD底物缓冲液，100ul/孔；室温15分钟。
９、2M　HSO终止反应（100ul/孔）。
10、加新配OPP底物缓冲液，100ul/孔，室温15分钟。
11、2M　H2SO4终止反应（100ul/孔）
12、肉眼判定或测定OD496值。
（三）　示教试验　　　沙门氏菌O…I噬菌体裂解试验。
　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　实验八　　鸡白痢的诊断
一、 目的
　掌握快速全血平板凝集反应并用来诊断鸡白痢。
二、实验器材
　　　小搪瓷盘　　　铁丝环　　　　滴管　　　　玻璃板　　　　干净纱布　　　　　　24号针头　　　　7号针头　　　　　灭菌大平皿　
　　　生理盐水　　　　鸡白痢凝集抗原液
三、实验步骤
（一） 快速全血平板凝集试验
１、 将鸡白痢诊断抗原液充分振荡混匀，用滴管吸取抗原滴2滴于玻板上。
２、 一人保定鸡，另一人用7号针头刺破被检鸡的翅静脉使其出血。
３、 用铁丝环沾取一滴环血液与玻板上的抗原液搅拌均匀，并涂开至直径约1。5cm大小的涂面。
４、 25℃时，于2分钟内出现明显的凝集颗粒或凝集片则为阳性反应。
（二） 示教实验
１、 鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定；
２、 间接血凝试验；
３、 琼脂扩散沉淀试验；
４、 抗体竞争ELISA试验。
注：鸡慢性呼吸道病的现场诊断是慢性呼吸病平板凝集抗原与受检全血做凝集试验。操作方法同鸡白痢的快速全血玻板凝集实验。