考博生化和分子生物学复习笔记-第19章
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二、β－脱羧 1．β－单纯脱羧 草酰乙酸→丙酮酸＋ CO2（酶为丙酮酸羧化酶）
2．β－氧化脱羧 苹果酸＋NAD＋→丙酮酸＋CO2＋NADPH＋H＋
呼吸链中各递氢体和递电子体的顺序排列是根据大量实验结果推出来的。
首先，根据呼吸链中各组分的氧化还原电位由低到高的顺序推出呼吸链中电子的传递方向为从NADH经辅酶Q、细胞色素体系到氧。
其次，利用呼吸链中的不少组分具有特殊的吸收光谱，而且得失电子后其吸收光谱发生改变。如NAD＋因含AMP，故在260nm处有一吸收峰，而当还原成NADH＋H＋后，则在340nm处出现一个新的吸收峰；FP因含黄素在370nm和450nm处有吸收峰，但当还原后，450nm处的吸收峰消失。因此在其全部处于还原状态时，缓慢通入氧气，利用分光光度法测定各组分的吸收峰的改变顺序，从而判断呼吸链中各组分的排列顺序。所得结果与第一种方法相同。
第三，利用一些特异的抑制剂阻断呼吸链的电子传递，那么阻断部位以前的电子传递体就会处于还原状态，而阻断部位以后的电子传递体则处于氧化状态。因此通过分析不同阻断情况下各组分的氧化还原状态，就可推出呼吸链各组分的排列顺序。
另外，当用去垢剂温和处理线粒体内膜时，得到了四种电子传递复合体。它们也按一定的顺序排列。
血糖指血液中的葡萄糖，主要供其他组织利用，特别是大脑几乎完全靠可通过血脑屏障的葡萄糖供能。血糖供应不足时，神经功能受损。因此维持血糖在70…110 mg/dl这个正常浓度范围甚为重要。
一、 血糖的来源与去路
来源： 食物中糖的消化吸收 肝糖原的分解 非糖物质的糖异生
去路： 氧化分解成CO2和H2O，并生成能量 合成肝糖原和肌糖原 转变成非糖物质如脂类和氨基酸等 转变成其他糖类如磷酸戊糖等 超过肾糖阈随尿排出
二、血糖水平的调节 血糖之所以能维持恒定，主要是血中葡萄糖的来源和去路每时每刻都保持平衡，血糖的恒定实际是身体各个组织在糖酵解、糖氧化、糖原合成与分解、糖异生种种代谢协同的结果。各种代谢途径的调节前面已有叙述，此处归纳一下几种激素对血糖的影响，它们的影响也是通过一些调节酶的激活或抑制而实施的。
降血糖激素 胰岛素是体内唯一的降血糖激素，它的作用有几个方面：
（1） 促进葡萄糖进入细胞
（2） 抑制糖原磷酸化酶，激活糖原合酶，加速肌、肝糖原的合成。
（3） 激活丙酮酸脱氢酶，加速丙酮酸脱羧生成乙酰辅酶A。
（4） 抑制磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的活性，降低糖异生。
（5） 减少脂肪组织动员脂肪酸，促进糖的有氧氧化。
升血糖激素 1。胰高血糖素 胰高血糖素抑制丙酮酸激酶和6磷酸果糖激酶1，增高果糖二磷酸酶活性，促进脂肪组织分解，促进糖异生。
2。糖皮质激素 促进肌肉蛋白质分解，增加糖异生原料，抑制肝外组织摄取葡萄糖，从而提高血糖。
3。肾上腺素 激活磷酸化酶，加快糖原分解，肝释出葡萄糖，肌肉输出乳酸供肝糖异生，这在应激时起作用。
血糖水平异常
1。高血糖及糖尿症 空腹血糖为7。22…7。78 mmol/L时称高血糖。肾糖阈为血糖8。89…10。00/L，当血糖值超过肾糖阈时，糖随尿排出，常见原因为糖尿病。 2。低血糖 空腹血糖为3。33…3。89 mmol/L造成低血糖，常见于胰性、肝性疾病，内分泌异常，肿瘤或饥饿状态。
ATP的利用与储存 虽然人类一切生理活动所需的能量主要糖、脂类等物质的分解代谢，但糖、脂类等物质中所蕴涵的能量必须转化为ATP形式方可被利用。所以ATP是机体所需能量的直接供给者。如肌肉收缩、神经传导、生物合成、吸收与分泌等过程所需能量均ATP。另外，在一些物质的合成过程中除需要ATP外还需其它高能磷酸化合物参与，如糖原合成过程中需要UTP，磷脂合成时需CTP，蛋白质合成时需GTP参与。但UTP、CTP、GTP等高能磷酸化合物的生成和补充有赖于ATP。 在肌肉和脑组织中，ATP可将其高能磷酸键转移给肌酸生成磷酸肌酸（CP），此反应由肌酸激酶（CPK）催化。磷酸肌酸为能量的贮存形式，其所含的高能磷酸键不能直接被利用，当肌肉和脑组织中ATP不足时，磷酸肌酸可将其高能磷酸键转移给ADP生成ATP，为生理活动提供能量。生化分子考研复习 经典 笔记
》氨基酸的重要化学反应
反应基团 试剂 主要产物 应用 P
α…NH2 茚三酮 紫色、红色物 对氨基酸显色 63
α＝NH2 茚三酮 黄色物 Pro的鉴定
α…NH2 HNO2 N2等 游离aa定量，蛋白质水解程度 59
α…NH2 DNFB二硝基氟苯Sanger试剂 DNP…aa二硝基苯黄色物 蛋白质N端测定一级结构分析标准图谱 6181
α…NH2 PITC苯异硫氰酸酯Edman试剂 PTC…aa在无水的酸中环化成PTH…aa 蛋白质N端测定一级结构分析aa顺序自动分析仪标准图谱 82
α…NH2 甲醛 羟甲基…aa和二羟甲基…aa 甲醛滴定aa含量（封闭氨基） 60
Arg的胍基 α…萘酚次溴酸钠坂口试剂 桃红色物 鉴定Arg
Met的…S…CH3 H2O2 过氧化物 吸烟有害，烟中的过氧化物，弹性蛋白酶，抑制剂Met，肺气肿。
Cys的…SH 碘代乙酸ICH2COOH过甲酸HCOOOH 乙酸硫基HOOC…CH2…S…磺基HS3O… 肽链拆分，作用与CYSS上的二硫键 65
His的咪唑基 重氮苯磺酸Pauly试剂 樱红色物（1His连2重） 鉴定His 65…66
Tyr的酚基 重氮苯磺酸Pauly试剂 桔黄色物 鉴定Tyr
Tyr的酚基 磷钼酸、磷钨酸Folin试剂 兰色物质 定量测定蛋白质、Tyr
Trp的吲哚基 对二甲基氨基苯甲醛 兰色物质 鉴定Trp
…OHSer、Thr、Tyr 激酶、ATP P…aa 调节酶的活性，测定酶的活性中心 65
蛋白质的颜色反应：可以用来定量定性测定蛋白质
双缩脲反应：红色，λm＝540nm
黄色反应：与HNO3的反应，生成硝基苯，呈黄色。皮肤遇到HNO3的情况，白→黄→橙黄。
米伦氏反应：与HgNO3 或HgNO2的反应，呈黄色，原理同上。
与乙醛酸的反应：红色，Trp的吲哚基的特定反应。
坂口反应：红色，Arg的胍基的反应。
福林反应：蓝色，是Tyr的酚基与磷钼酸和磷钨酸的反应。
印三酮反应：紫红色
Pauly反应：樱红色，His的咪唑基。
密码表中的几个重要密码子（8个）：
起始密码：无论原核还是真核都是AUG，原核生物对应的是fMet，真核生物对应的是Met。极少数原核生物用GUG，对应fMet。不作起始密码时，也就是处于中间时，AUG对应的是Met，GUG对应Val。
终止密码：UAA、 UAG、 UGA， 它们是空密码，不对应任何AA。
易记密码：AAA：Lys
GGG：Gly
CCC：Pro
UUU：Phe
单核糖体：1个大亚基＋1个小亚基，原核70S（50＋30），真核80S（60＋40），S不能简单的相加。见P503或讲义P49草图
多聚核糖体：由一条mRNA串起来的多个核糖体，见P509或讲义P49草图。 功能
结合mRNA：夹在大亚基和小亚基之间。
结合氨酰tRNA、肽酰tRNA：在大亚基上。
A位：结合氨酰tRNA的部位，Amino…， 第一个氨酰tRNA例外。
P位：结合肽酰tRNA的部位，Peptide…， fMet…tRNAfMet例外。
E位：结合空载tRNA，Exit
形成肽键：由肽酰转移酶作用，最新的发现表明此酶由rRNA（原核23S）来充当。
牛脾磷酸二酯酶SPDase 外切酶 DNA、RNA 从5’端作用（要求5’端有游离的5’…OH）；切点HO…Np↓…… 3’…NMP
蛇毒磷酸二酯酶VPDase 外切酶 DNA、RNA 从3’端作用（要求3’端有游离的3’…OH）； 切点……↓pN…OH 5’…NMP
磷酸单酯酶Pmase 外切酶 DNA、RNA 去掉端点核苷酸的游离磷酸根，见P141p↓N……N↓p 端点有游离的…OH
牛胰核糖核酸酶RnaseⅠ 内切酶 RNA 左边为Py，切点见P140…Pyp↓N… 3’端Py核苷酸具有游离的3’…○P
核糖核酸酶T1Rnase T1 内切酶 RNA 左边为G，切点见P140…Gp↓N… 3’端G核苷酸具有游离的3’…○P
核糖核酸酶U2Rnase U2 内切酶 RNA 左边为Pu，切点见P140…Pup↓N… 3’端Pu核苷酸具有游离的3’…○P
Southern Blotting（南印迹）：用于钓基因，即用已知的DNA单链或RNA，钓取未知DNA分子中的基因，方法如下：
未知的DNA DNA限制性内切酶→ DNA片段 → 琼脂糖电泳分离 → 碱液变性 → 影印在硝酸纤维薄膜上 → 与放射性标记的已知DNA单链或RNA杂交 → 放射自显影
Northern Blotting（北印迹）：用已知的DNA钓mRNA，方法如下：
众多未知的RNA → 电泳分离 → 变性 → 影印 → 用标记的已知DNA单链杂交 → 放射自显影
Western Blotting（西印迹）：蛋白质与抗体的杂交，跟核酸无关。
Eastern Blotting（东印迹）：？
生活不能没有快乐，学习不能没有方法，考试不能没有技巧（考试也是所学知识的一种运用！）学习：看小说似的预习几遍，尤其上课要用心听讲（省时省力），当场或课后整理笔记（重要性），择重记忆（注意方法），几个小窍门：早上多吃糖（原因，脑血糖），站立听课（肾上腺，恐怖电影，我讲课）。 生物化学记忆歌诀
碱基的结构：基本碱基一共只有5种，从分子骨架上分将碱基分为嘌呤碱基和嘧啶碱基。
1。嘌呤碱基：
A（腺嘌呤）的结构：
G（鸟嘌呤）的结构：
2。嘧啶（Py）碱基：
C（胞嘧啶）：氨基态，
U（尿嘧啶）：酮式，
T（胸腺嘧啶）：
记忆口诀：先将嘌呤和嘧啶的结构式记住，然后再记住下面口诀
胸前一滩尿：U ＋ 一碳基团（甲基）＝ T
尿里两泡泡：嘧啶中有两个O＝U
上面一个是氨气包：U靠上面的一个O换成…NH2就是C
鸟儿张嘴吸氨气：张嘴即O，嘌呤有O又有…NH2 ＝ A
线儿将鸟嘴来系，注意换气：系嘴即去掉O，G去掉O再把…NH2换个位置＝A
生糖、生酮、生糖兼生酮氨基酸：
生酮＋生糖兼生酮=“一两色素本来老”（异亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、酪氨酸），其中生酮氨基酸为“亮赖”；除了这7个氨基酸外，其余均为生糖氨基酸。
酸性氨基酸：天谷酸——天上的谷子很酸，（天冬氨酸、谷氨酸） 碱性氨基酸：赖精组
芳香族氨基酸在280nm处有最大吸收峰 色老笨…只可意会不可言传。
一碳单位的来源
肝胆阻塞死 （甘氨酸、蛋氨酸、组氨酸、色氨酸、丝氨酸）。 （色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸），顺序一定要记清，色》；酪》；苯丙，
糖醛酸，合成维生素C的酶
古龙唐僧（的）内子（爱）养画眉（古洛糖酸内酯氧化酶）
双螺旋结构的特点：
右双螺旋，反向平行
碱基互补，氢键维系
主链在外，碱基在内
维生素A总结
V。A视黄醇或醛，多种异构分顺反。
萝卜蔬菜多益善，因其含有V。A原。
主要影响暗视觉，缺乏夜盲看不见，
还使上皮不健全，得上干眼易感染。
促进发育抗氧化，氧压低时更明显。
DNA双螺旋结构：
DNA，双螺旋，正反向，互补链。A对T，GC连，配对时，*氢键，，十碱基，转一圈，螺距34点中间。碱基力和氢键，维持螺旋结构坚。（AT2，GC3是指之间二个氢键GC间三个。螺距34点中间即3。4）
维生素B6
B6兄弟三，吡哆醛、醇、胺。
他们的磷酸物，脱羧又转氨。
三羧酸循环
乙酰草酰成柠檬，柠檬又成α…酮
琥酰琥酸延胡索，苹果落在草丛中。
β…氧化
β…氧化是重点，氧化对象是脂酰，脱氢加水再脱氢，
硫解切掉两个碳，产物乙酰COA，最后进入三循环。
酮体
酮体一家兄弟三，丙酮还有乙乙酸，
再加β…羟丁酸，生成部位是在肝，
肝脏 生酮肝不用，体小易溶往外送，
容易摄入组织中，氧化分解把能功。
参考书
1。《生物化学》沈同，全面，繁多，不易懂，有错处。
2。《生物化学原理》伦宁格，国际通用的最佳生化教材，全面，图多，有原文和中译文2种版本，考专业GRE必读。
3。《生物化学》郑集，少而精，通俗易懂。
4。《生物化学系列丛书》上海生化所，专题，扩展知识面。
5。《Nature》英国，月刊，国际最高学术刊物，每期都有生化内容。
6。《Science》美国，月刊，国际最高学术刊物，每期都有生化内容。
7。《Cell》美国，月刊，国际著名学术刊物，每期都有生化内容。
8。《Biochemistry》美国，月刊，国际著名学术刊物
中国科学院遗传与发育生物学研究所博士研究生生物化学入学试题
2000年 1．酶蛋白的构象决定了酶对底物的专一性，请描述并图示酶与底物相互关系的几种学说。（20分）
2．什么是DNA的半保留复制和半不连续复制？如何证明？真核细胞与原核细胞的DNA复制有何不同？（20分）
3．概述可作为纯化依据的蛋白质性质及据此发展的方法。（20分）
4．简述酵解和发酵两个过程并说明两者的异同。（15分）
5．吃多了高蛋白食物为什么需要多喝水？（10分）
6．在非极端环境的生物体中是否存在氰化物不敏感的呼吸作用？如果有，其可能的生物学意义是什么？（5分）
以下两题中任选一题（10分）
7．概述植物或微生物细胞感应（应答）环境刺激因子（如养分缺乏、热、冷、干旱、强光等）的可能的生物化学过程模式。
8．细胞编程性死亡又称细胞凋亡是细胞的一种基本生命现象， 请阐述细胞凋亡的生物学意义及主要生物化学特征。
2001年 1。 请阐明蛋白质间最重要的原子相互作用。（15分）
2。 蛋白质的测活是蛋白纯化过程中的重要组成部分，可以从哪些方面来考虑建立一个快速、简便、定量的测活方法。（15分）
3。 质膜是细胞的第一屏障，请概述小分子通过质膜的转运机 制。（15分）
4。 举例说明蛋白质三级结构决定于它的氨基酸结构。（15分）
5。 运用免疫学的方法能开展哪些分子生物学研究？（15分）
6。 “一个基因一个蛋白”的说法对吗？为什么？（12分）
7。 请从生化角度评论目前市售的“核酸营养液”。（13分）
2002年 注：请将试卷写在答题纸上；不用抄题，但要写请题号；草稿纸上答题无效。
一名词解释20分1。同源蛋白质 （homologous protein）2。 构型 （configuration）3。 构象 （conformation）4。 钙调蛋白（calmodulin； CAM or CaM）5。逆转座子 （retrotransposon）
二、以动物细胞或植物细胞为例说明细胞中的膜结构及其功能。（12分）
三、在研究位置基因的功能时往往采用推定的该基因所编码的氨基酸序列与已知功能的蛋白质的氨基酸序列比较来推断，你认为这种比较应采用什么原则？为什么？（12分）
四、真核基因在原核细胞中表达的蛋白质常常失去生物活性，为什么？举例说明。（12分）
五、简述信号肽的结构特点、功能和从蛋白质产物中切除的机理。（12分）
六、分子筛、离子交换和亲和层析是三种分离、醇化蛋白质的方法，你如何根据所要分离、纯化的蛋白质的性质选择使用。（12分）
七、酶联免疫吸附实验（EL
