考博生化和分子生物学复习笔记-第20章

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七、酶联免疫吸附实验（ELISA）的基本原理是什么？如何用此方法检测样品中的抗原和抗体？（12分）
八、某一个蛋白，SDS凝胶电泳表明其分子量位于16900于37100标准带之间，当用巯基乙醇和碘乙酸处理该蛋白后经SDS凝胶电泳分析仍得到一条带，但分子量接近标准带13370处，请推断此蛋白质的结构？为什么第二次用前要加碘乙酸？（8分）
2003年　一、简要解释下列名词（每词5分，共30分）
1、寡糖与多糖　　　2、端粒酶3、酮体4、生糖氨基酸与生酮氨基酸5、终止子和终止因子　　　6、分子伴侣（molecular　　chaperone）
二、以下问答题任选7题回答（每题10分，共70分）：
1、简述关于生物膜运输的分子机制的几种主要假设以及他们间的相互关系。
2、蛋白质磷酸化和去磷酸化的生物学意义是什么？
3、请解释酶促反应的前馈和反馈（feedforward　和　feedback）及其意义。
4、什么机制保证了DNA复制的准确性？
5、神经和肌肉等细胞活动的直接供能者是ATP。然而，ATP在细胞中含量很低，在哺乳动物肌肉中仅3　…　8mmol　/　kg。问：是否存在其它的贮能物质，又是怎样“运作”的呢？
6、为什么C4植物即使在大气CO2　浓度很低时其光合效率仍很高？
7、逆转座子广泛存在于真核生物基因组中，简述它的生物学意义并说明原因。
8、DNA重组中同源重组是最基本的重组方式，它的过程是什么？有什么意义？
2004年注意：（1）答题必须简明扼要。如有必要，可以图示辅助说明；（2）答题时可以不必抄题，但需注明题目序号；（3）所有答题不要写在试卷上，请全部书写在答题纸上。选答题：请在下列七题中任选五题，总分为100分。若多答，按其中得分最低的五题记入总分。
一、分离纯化蛋白质是根据蛋白质的哪些性质进行的？举例说明3种层析的操作（解释溶液的盐离子浓度、PH值等变化）及其原理。（20分）
二、试举一例说明激素介导的信号转导的生理意义和作用机制。（20分）
三、简述两类真核细胞蛋白质降解的机制以及它们的生物学意义。（20分）
四、基因HOR的转录受激素X的正调控。试设计实验分析鉴定其顺式作用元件（cis…elements）、反式因子（trans…factors）及其调控模式。（20
五　在应用重组DNA技术表达某些蛋白时，经常在表达的蛋白末端加上一段氨基酸序列作为标签（tag）。说明标签序列在生物学研究中的应用（20
六、　　　　　举2－3例说明组蛋白翻译后修饰的机制及其生物学意义。（20分）
七、　　　　　简述miRNA（microRNA）和siRNA的结构和功能。（20分）
中国科学院微生物研究所2000年博士研究生入学考试生物化学试题
试写出1999年诺贝尔生理学/医学奖获得者的姓名和主要贡献。（10分）
写出下列英文缩写符号的中文名称（共10个；每个1分；共10分）
PCR　2。　NMR　3。　RFLC　4。hnRNA　5。CaM
6。DTT　7。AchR　8。ELISA　9。ddTTP　10。ACTH
试举出3种在细胞信息传递中起重要作用的蛋白激酶；并分别说明其结构与功能的关系。（15分）
填空题（共35个空；每空1分；共35分）
1。细菌中嘧啶合成所特有的第一个酶是____________；它为该途径的最终产物_________所抑制。
2。长度为20μm的病毒DNA分子其轴比（长度：直径）是______。
3。多肽合成的起始密码子总是_______。
4。生物合成的还原力是以______的形式供给的。
5。利用______酶；能够由mRNA模板合成cDNA拷贝。
6。测定DNA顺序的Maxam…Gilbert化学法应用______使在嘌呤核苷酸处进行断裂；应用______使在嘧啶核苷酸处进行断裂。
7。每个冈崎片段是借助于连接它的______末端上的一小段________而合成的。
8。在脂肪酸生物合成中酰基的载体为______；在脂肪酸氧化中酰基的载体为_______。
9。氨基酸代谢的一碳单位主要由_______供给；核苷酸生物合成中的一碳单位主要由　供给。
10。在酶的催化中；既可作为质子供体又可作为质子受体的氨基酸残基为__________。
11。维持蛋白质三级结构最重要的作用力是_________。
12。DEAE—纤维素是_________交换剂；CM　—纤维素是________交换剂。
13。糖蛋白中糖基与蛋白质肽键主要是通过两类糖苷键相结合；即　_________和________。
14。Z—DNA的旋转方向为________；磷酸核糖骨架呈________。
15。细菌中限制性内切酶的生物学作用是__________。
16。测定酶活力时；酶促反应速度与底物浓度应呈_________级反应。
17。胰蛋白酶亲和标记试剂是__________；标记的氨基酸残基是_______。
18。一般而言；五；六肽以下的小肽已有________结构单元；十肽以上的肽有______结构单元；而三十肽以上才出现_________结构单元。　　　
19。膜蛋白按它们与脂双层相互作用方式可分为两类________和________。
20。　常用的DNA超螺旋结构的嵌合剂是__________。
21。蛋白质变性学说首先是由我国生物化学家__________提出的。
22。天然存在的脂肪酸碳原子数通常为________数；第一个双键一般位于_________。
分析计算题（共6题；30分）
葡萄糖完全燃烧生成CO2和水；ΔGo'为…686Kcal/mol。当此过程经糖酵解途径；TCA循环的线粒体电子传递发生于细胞内时；降解每个分子葡萄糖能产生多少个ATP分子　
假设在细胞内的条件下；ATP水解的ΔGo'=　–10kcal/　mol；试问由葡萄糖氧化所释放的能量有百分之几是以ATP形式被储存起来的　
其余的能量会发生什么变化　（6分）
给出下列反应中所消耗的高能磷酸键的数目（4分）
从核苷单磷酸开始；往增长中的mRNA插入一个核苷酸。
从游离氨基酸开始；往增长中的多肽链插入一个氨基酸。
组织培养的哺乳动物细胞系中每个细胞的双键DNA有1。2m长。这些细胞中S期长达5小时。如果这些细胞中　
DNA股增长的速度与大肠杆菌相同；即大约每分钟16μm；那么染色体复制时有多少个
中国科学院微生物研究所2000年博士研究生入学考试分子生物学试题
一　是非题（每空1分；共10分；打〃√〃为是；打〃Х〃为非；不倒扣分）
1。反密码子是DNA中的三个核苷酸序列。　（　）
2。顺反子是一种功能单位；是一种结构基因。　（　）
3。增强子的作用与它所处的位置及方向有关。　（　）
4。反义RNA能在转义水平上调节基因表达。　（　）
5。操纵基因不能控制结构基因的转录。　（　）
6。真核生物DNA中；主要的甲基化碱基是5…甲基胞嘧啶。　（　）　
7。通常一个基因的甲基化水平与其转录水平正相关。　（　）
8。Ribozyme是一类对自身有较底水解活力的RNA。　（　）
9。Ribozyme也是生物催化剂；与酶的本质是一样的。　（　）
10。SDS…PAGE是按蛋白质（亚基）的分子量对其进行分离的。　（　）
二；填空题（每空1分；共20分）
1。别构效应物是指能与酶的____________结合；从而改变酶活性的物质。
2。DNA　Polymerase　I　是一种在_____________中起作用的酶；而DNA　Polymerase　Ⅱ　
的功能则是_____________。
3。延伸因子是在_____________形成中起延伸作用的蛋白因子。
4。启动子是在DNA分子中；可与______________结合的那个位置；使转录启动；它把　
基因与______________基因分开。；
5。类病毒是一种与病毒相似的____________；含___________；而没有____________。
6。反转录酶是一种依赖于　的　。
7。RNA　Polymerase　A催化的转录产物是________________。
RNA　Polymerase　B催化的转录产物是__________________。
RNA　Polymerase　C催化的转录产物是____________________。
8。突变是由于一个基因发生___________而导致________或____________中基因类型发生突然而稳定的变化过程。
9。起始因子是一种_______________的蛋白因子。
10。调节子是细菌中；诱导的______________基因系统。
三；问答题（共70分）
简述真核生物基因表达调控的五个阶段及其调控内容。（25分）　　请举出五种研究基因表达调控的方法；并简要说明之。（20分）
以大鼠为例；图解说明转基因动物的研究基本程序。（25分）
中国科学院微生物研究所
2000年博士研究生入学考试生物化学试题（非生化专业）　　
名词解释（每题2分；总分20）米氏常数（Km）辅酶反馈抑制反转录　阻遏蛋白同功酶脂蛋白线粒体启动子10。密码子
选择题（每题3分；总共15分）
1　NADH是
A水解酶的辅酶　B是氧化还原酶辅酶
C是转移酶辅酶　D是异构酶辅酶
2　蛋白质合成的方向是
A从羧基到氨基　B从氨基到羧基　C从中间开始　D无方向
3　mRNA上信号被转录的方向是
A从5'…端向3'端　B从3'…端向5'端　C从中间开始　D无方向
4　氨基酸生物合成调控机制中最有效的是通过
A合成过程的中间物抑制第一个酶的活性
B合成途径以外的物质抑制某种酶活性
C合成过程的终端产物抑制反应系列中第一个酶的活性
D酶的构形变化实现的
5　DNA复制存在正调控和负调控；调控分子是
A　蛋白质　B　DNA　C蛋白质和DNA　D蛋白质或DNA
是非题（每题2分共20分）
1。只有L…氨基酸参与蛋白质组成。是　非
2。酶的底物专一性是指只能催化一种底物进行反应。是　非
3。酶可加速达成反应平衡；也可改变平衡的位置。是　非
4。酶催化反应的最大反应速度（Vmax）因竞争性抑制而改变。是　非
5。ATP…ADP循环是生物体系中能量交换的基本方式。是　非
6。糖酵解是把葡萄糖转变为丙酮酸时产生ATP的一系列反应。是　非
7。代谢中的一个重要的一般原理是生物合成途径和降解途径几乎总是截然不同的。是　非
8。　DNA复制时一条链的合成方向与复制叉转移方向相反。是　非
9。　氨基酸的代谢总是先脱去氨基。是　非
10。构成糖蛋白的糖肽连接键；简称为糖肽键。以丝氨酸；苏氨酸和酪氨酸的羟基为连接点；形成…O…糖苷键型。是　非
填空题（每1空格0。5分）总分25
1。蛋白质的一级结构就是（　）；二级结构是指（　）的空间关系；三级结构是指（　）的空间关系；四级结构是指（　）。
蛋白质中的每一条肽链称为（　）；另一有用术语是（　）
2。胰岛素原经（　）水解；除去（　）得有活性的胰岛素。
3。该糖名称（　）；由（　）与（　）通过（　）（　）糖苷键连接组成。
4。所有DNA中的腺嘌呤与胸腺嘧啶的摩尔含量（　）；鸟嘌呤与胞嘧啶的摩尔含量（　）。因此；嘌呤的总含量与嘧啶的总含量（　
）。不同生物种的DNA具有（　）碱基组成。DNA的碱基组成没有（　）特异性。（　）（　）和（　）都不影响DNA的碱基组成。
5。蛋白质的生物学功能是蛋白质分子的（　）所具有的性质。蛋白质受到（　）因素的作用时；引起生物活性的（　）；（　
）以及其它的物理化学常数的改变；这种变化称为蛋白质的（　）。其实质是由于维持高级结构的（　）遭到破坏而造成的（　）的解体；但未涉及（　
）的破裂。
6。根据核酸的物化性质开展了一系列研究核酸的重要方法。　核酸在（　）nm区有一紫外吸收峰；峰尖在（　
）nm左右。利用这一特性；可用分光光度计定量测定核酸（　）和定性鉴定核酸（　）。
7。三羧酸循环是在细胞的（　）中进行的。首先酵解产物（　）在（　）存在下氧化脱羧变成（　）；再与三羧酸循环中的（　
）缩合成柠檬酸。柠檬酸（　）成顺乌头酸。乌头酸经（　）及（　）作用依次变成异柠檬酸及（　）。这4种酸都含有3个羧基；故称为三羧酸循环。
8。分离蛋白质化合物的各种方法主要经过根据蛋白质在溶液中的下列性质：1）（　）；2）（　）；3）（　）；4）（　）；5）（　）。
9。DNA的复制是一个（　）的过程；即子代分子的（　）亲代；（　）是新合成的。这个复制特点保证了遗传信息的（　）。
问答题（每题10分）20分
进行酶活力测定时应当注意什么　为什么测定酶活力时以测定初速度为宜；并且底物浓度应大大地超过酶浓度　
DNA重组技术包括那些步骤　有那些应用价值
中国科学院微生物研究所2001年博士研究生入学考试分子生物学试题（注：请将答案写在答题纸上；答在考卷上无效）简答题（每题5分；共40分）
试述PCR反应的基本原理和操作过程。
为什么PITG能诱导Lac　Operon表达　
分子伴侣帮助新生肽正确折叠的分子机制是什么　
PBR322和pUC质粒使用了相同类型的复制子；但前者在宿主细胞内只有15…20拷贝；而后者可高达500…700拷贝。为什么　
DNA复制时的岗崎片段是怎样产生的　
如果已知细胞中有3个基因（proA；proB和proC）参与脯氨酸的生物合成；那么；proA＋　proB＋　proC＋与pro＋有何不同　
你能写出具有proA＋　proB…　proC＋的基因型吗　
为什么原核生物基因表达主要在转录水平上受调控　
请说说σ因子及其功能。
祥答题（每题12分；共60分）
9。你以经可克隆得到一个编码60kDa蛋白A的　
cDNA相互补的mRNA；但它编码了一个62。5kDa的蛋白质B；该蛋白能够被蛋白A的抗体所识别。你知道这一发现有什么意义吗　
10。你手中有一个cDNA克隆；如何才能克隆到其5'上游区的序列呢　
11。有两个基因在同一转录信号的刺激下得到表达；合成两个蛋白质。在移去转录信号后；其中一个蛋白的合成速率并没有发生太大的变化；而另一蛋白质的合成几乎停止了。请解释。
12。你知道拟南芥基因组中共有多少条染色体　大概有多少个ORF　
在不知道某个生物基因组全序列时；科学家是根据哪些原则来推测该生物单倍体细胞中所含有的ORF总数的　
13。科学家常用分子间相互作用技术来研究不同蛋白质之间的关系。简单说明该技术的操作原理。
中国科学院微生物研究所　　　　　　　2001年博士研究生入学考试生物化学试题　　　　（注：请将答案写在答题纸上；答在考卷上无效）
2000年诺贝尔生理学/医学奖获得者为Carlsson　A；Greengard　和Pkandel　　E三人；试简要说明三人各自所做出的主要贡献。（10分）
何谓酶的活性中心　简述酶活性中心的特点；举例说明研究酶活性中心的主要方法。　（15分）
什么是核酶（ribozyme）和抗体酶（abzyme）　它们和酶有什么不同　（10分）
有一种蛋白质；在某组织内含量低；很难分离提取。现已知其分子量；并已得到该蛋白质的抗体。问用哪些实验方法可以初步证实组织内的确含该蛋白质　（5分）
从高等生物基因中克隆的完整基因为什么在大肠杆菌中不能正确表达　
动物氧化葡萄糖要经过哪些重要途径　氧化1摩尔葡萄糖可以净化多少摩尔ATP　（15分）
今有含下列性质蛋白质的混合物；（A）分子量12；000；pI=10；　（B）分子量62；000；pI=4；　
（C）分子量28；000；pI=7；　
（D）分子量9；000；pI=5。若不考虑其他因素；当它们（1）流经DEAE—纤维素交换柱；用线性盐梯度洗脱时；（2）流经Sephadex　
G—50凝胶柱时；这些蛋白质的洗脱顺序如何　（4分）
今从一种罕见的真菌中分离到一个八肽；它具有防止秃发的作用。经分析；它的氨基酸组成是Lys2　；Asp1；；Tyr1　
；Phe1；Gly1；；Ser1；Ala1。此八肽与FDNB反应并用酸水解后；释放出DNP…Glp将它用胰蛋白酶酶解后；则得到氨基酸组成为：　
Lys1；Ala1；Ser1和Gly1；；Phe1；Lys1两个三肽；还有一个2肽。将它与胰凝乳蛋白酶反应后；释放出游离的Asp；1个四肽和1个三肽；四肽的氨基酸组成是：Lys1；Ser1；Phe1和Ala1；三肽与FDNB反应后；再用酸分解；释放出DNP…Gly。试问这八肽的氨基酸顺序是什么　
（6分）
填空题（共30个空；每空1分；共30分）
糖肽连接键的主要类型有————和————。
大多数多肽激素是通过激活靶细胞中___________酶