考博生化和分子生物学复习笔记-第23章
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争酶的活性中心，从而阻碍酶与底物结合的即为竞争性抑 制剂它能使反应Vmax不变Km值变大，故这种抑制作用可通过增加底物浓度来消除，非 竞争性抑制剂使反应 Vmax 降低，Km 不变，其与酶活性中心外的必需基团结合，不影响 酶与底物的结合，故 Km 值不变，因抑制剂与底物之间无竞争关系，故此抑制作用不能通 过增加底物浓度来消除。 十三、测定酶活性时，对底物浓度有何要求，为什么（1991北医） 考点：酶活性测定的条件 解析：测定酶活性时，首先底物的量要足够，以使酶被充分饱和，获取最高反应速度，充分 反映待测酶的活力，但底物量也不能过多，以 20～100Km 为宜，过高的底物浓度有时反 会对酶有抑制作用，这是因为同一酶分子上同时结合几个作用物分子，使酶分子的诸多必需 基团不能针对一个作用物分子进行催化攻击。 十四、简要说明，设计一个定量测定胰液中脂肪酶活性的方法需要考虑哪些因素（1995 北 医） 考点：酶活性的测定 热点：因为在生物组织中，酶蛋白含量甚微，所以我们要确定酶量的多寡主要是测定酶活性， 即在规定的实验条件下，测定该酶催化反应的速度，用单位时间内底物的消耗或产物的生成 量表示，因而测定过程中，要保持一定的实验条件，这就是酶活性测定中最重要的内容。 解析：许多因素可影响酶促反应速度，故要测胰液中脂肪酶活性需要考虑如下因素，使各种 因素相对恒定： ①酶的样品应作适当的处理； ②底物的量要足够，使酶被充分饱和，以充分反映待测酶活力； ③应保持酶足够的浓度； ④根据反应时间选择最适反应温度；
⑤根据不同底物、缓冲液选择最适pH值； ⑥反应体系中应有适当的辅助因子、激活剂，除去抑制剂； ⑦可以终止反应或有连续监测装置能追踪反应过程 自测题及模拟训练题 选择： 一、胰蛋白酶主要水解（）（1995北医） A。赖氨酸或精氨酸的羧基组成的肽键 B。氨基末端肽键 C。芳香族氨基酸残基组成的肽键 D。中性脂肪族氨基酸组成的肽键 E。羧基末端肽键 答案：A 考点：多肽链中氨基酸序列分析常用的酶 解析：蛋白质进行氨基酸序列分析除了应知道其基本步骤外，还应知道每一步基本原理及其 中用到的试剂或酶，这些酶作用位点的区别，如：胰凝乳蛋白酶水解芳香族氨基酸羧基侧的 肽键，溴化氰水解甲硫氨酸羧基侧的肽键；测定氨基末端常用的试剂为二硝基氟苯，丹磺酰 氯，测定羧基末端氨基酸常用羧肽酶，Edman降解法测氨基酸排列顺序用的是异硫氰酸苯 酯。 二、维持球蛋白三级结构稳定的最重要的键或作用力是（）（1995北医） A。二硫键 B。盐键 C。氢键D。范德华力 E。疏水键 答案：E 考点：维持蛋白质结构的化学键 解析：维持蛋白质一级结构的主要是肽键，二级结构主要是氢键，三级和四级结构靠次级键 维持，这其中最主要的是疏水作用，疏水键、盐键、氢键、范德华力、二硫键都参与三级结 构的形成，要区分这些化学键的含义：蛋白质中众多疏水基团之间的作用力即为疏水键；酸 性和碱性氨基酸可带电荷，正负电荷相互作用形成盐键；与氢共用电子对形成的键为氢键； 半胱氨酸之间可以二硫键结合。 三、下列关于蛋白质的叙述，哪一项不正确（）（1995北医） A。蛋白质的糖基化或磷酸化可影响蛋白质的构象 B。β—片层的形成需要二硫键 C。加入硫酸铵可使溶液中蛋白质变性 D。有些蛋白质可以两种不同构象存在 E。肽键的部分双键特性对蛋白质的二级结构形成极为重要 答案：B 考点：蛋白质的空间结构组成 解析：首先要明确构象与构型的区别，一般来说构型改变需要涉及共价键的断裂与生成，而 构象的改变无需共价键破坏，只需单键的旋转和非共价键改变就可形成新的构象，蛋白质中 共价键常指的是肽键，蛋白质的变构调节和共价修饰都可引起构象改变，故A、D是正确的， 其次要记住蛋白质各级结构中主要的化学键，象 β 片层二级结构之间主要是氢键，所以 B 是错的，肽键的部分双键特性对形成肽单元是重要的，对二级结构的形成也是重要的。 四、某种酶的活性需要解离的异吡唑基和巯基，当底物含赖氨酸残基时，为了与酶结合， 氨基必须带正电荷，此反应最适 pH 是（）（注各基团 pk 值①异吡唑基＝6②巯基＝8③氨
基＝10。5） A。5B 。6C 。7D。8E。9（1996北医） 答案：E 考点：蛋白质的两性电离，酶最适pH值。 解析：此反应最适pH值要满足两个条件：①酶的异吡唑基与巯基要处于解离状态②底物的 氨基必须带正电荷，即三个基团都要处于解离状态，对…NH2来说要解离，pH 应小于其 pk 值，H＋才会与…NH2 结合为…NH＋3 对…SH 来说要解离，pH 值应大于其 pK 值，故最 适pH值至少应大于8，小于10。5选E。 五、已知某种酶的 Km 值为 0。05mol/l，试问要使此酶催化的反应速度达最大反应速度的 80％，底物浓度应是多少？（）（1996 北医） A。0。04 mol/lB。0。08mol/lC。0。02mol/lD。0。05mol/lE。0。20mol/l 答案：E 考点：米氏方程的理解和应用 解析：米氏方程V＝Vmax［S］ Km＋［S］ 对同一酶与底物，同样的反应环境，Vmax， 〖〗 ， Km 是一定值，故 V 只与［S］有关，所以可将题中条件代入公式得 80％Vmax＝Vmax ［S］ 0。05＋［S］→［S］＝0。2mol/l。 〖〗 六、下列关于B…DNA双螺旋结构模型的叙述中哪一项是错误的（）（1997北医） A。两股链方向相反 B。两链通过碱基之间的氢键相连 C。为右手螺旋，每个螺旋为 10 个碱基对 D。碱基位于螺旋外侧 E。螺旋直径为 2nm 答案：D 考点：DNA的二级结构 解析：B…DNA即我们通常所说的Watson…Crick模型结构，其碱基位于螺旋内侧，核糖和 磷酸基骨架才位于外侧。
七、在核酸中占9…11％，可用于计算核酸含量的元素是（）（1997北医） A。CB。OC。ND。HE。P 答案：E 考点：核酸的化学组成 解析：正如 N 在蛋白质中含量稳定一样，P 在核酸中含量较多且较恒定，可以通过测定样 品中P的含量对核酸进行定量分析。
八、下列对活化能的描述哪项是恰当的（）（1997北医） A。随温度而改变 B。是底物和产物能量水平的差值 C。酶降低反应活化能的程度与一般催化剂相同 D。是底物分子从初态转变到过渡态所需要的能量 答案：D 考点：酶的催化原理 解析：酶就是通过降低反应活化能而增加反应速度的，且比一般催化剂更有效地降低活化能。 九、下列哪种试剂可使蛋白质的二硫键打开（）（1996北医） A。溴化氰 B。碘乙醇 C。2，4…二硝基氟苯
D。三氯醋酸 E。β…巯基乙醇 答案：E 考点：蛋白质序列测定中拆开二硫键的方法 解析：拆开二硫键的方法有两类：过甲酸氧化法和巯基化合物还原法。后者常用的试剂为β巯基乙醇、二硫苏糖醇。 十、多肽链中主链骨架的组成是（）（1996北医） A。…NCCNNCCNNCCNBNHCONHCONHC。…CHNOCHNOCHNODOHCNOHCNOH答案：B 考点：肽键的组成 解析：多肽链是通过氨基酸相连成肽键而构成的。故其骨架组成为前一氨基酸的羧基脱…OH 与后一氨基酸的氨基脱氢，然后二者以酰胺键相连，即肽键组成为CONH。 十一、细菌核糖体RNA中的大亚基由以下物质组成（）（1996北医） A。5SrRNA、18SrRNA、5。8SrRNA 和49种蛋白质 B。5SrRNA、28SrRNA、5。8SrRNA和49种蛋白质 C。5SrRNA、23SrRNA和 21 种蛋白质 D。5SrRNA、23SrRNA 和31 种蛋白质 E。5SrRNA、16SrRNA和31 种蛋白质 答案：D 考点：核蛋白体的结构 解析：这是记忆性的内容，记住原核、真核生物在核蛋白体组成上的区别就可作答。 十二、试选出胰蛋白酶原激活的正确形式（）（1996北医） A。蛋白激酶水解掉酶原分子上的4 肽 B。胰蛋的酶水解掉酶原分子上的4 肽 C。肠激酶水解掉酶原分子上的 6 肽 D。胰蛋白酶水解掉酶原分子上的8 肽 答案：C 考点：酶活性的调节中酶原的激活 解析：酶原的激活是调节酶活性的重要方式，多是在酶的作用下水解掉一个或几个短肽，转 化成相应的酶。 十三、DNA受热变性时（）（1998北医） A。在 260nm 处的吸光度下降 B。多核苷酸链断裂成寡核苷酸链 C。碱基对可形成氢键 D。加入互补 RNA 链，再冷却，可形成 DNA/RNA杂交分子 E。溶液粘度增加 答案：D 考点：DNA的变性、复性和杂交 解析：DNA变性时是双链之间的氢键被解开，而核苷酸链并不断裂，DNA降解才是核苷酸 链断裂成寡核苷酸或单核苷酸，且变性时吸光值上升，本来核酸是高分子，粘度很大，变性 后粘度不会增加。
十四、DNA的共价键包括下列哪几种键（）（1990北医） A。连在脱氧核糖 C…1′上的腺嘌呤以 β…糖苷键相连 B。3′…5′磷酸二酯键 C。磷酸—核糖的 5′…OH的酯键 D。磷酸——核糖 2′…OH的酯键 答案：A、B、C 考点：DNA的分子结构组成及其化学键 解析：DNA共价键指DNA一级结构中的各种化学键A、B、C都是但D不对，因DNA是 脱氧核糖核苷酸，其核糖2′位上无…OH而是…H。 十五、从组织提取酶时，最理想的结果是（）（1991北医） A。蛋白质的产量最多，酶单位数最大 B。酶单位数最大，比活力最高 C。需要补充的辅酶量最大 D。Km 值最低 E。比活力最高 答案：B 考点：酶的活力测定及其活力的含义。 解析：提取酶时，酶含量常用酶活力表示：即在1分钟内转化1umol底物所需的酶量为一 个单位，而每毫克酶蛋白所具有的酶活力，称比活力。对同一种酶来说，比活力越高，表明 酶愈纯，提取酶时，最理想的结果是酶量多，纯度高，所以也就是酶活力单位最大，比活力 最高。 十六、测定蛋白质分子量的方法（）（1991北医） A。盐析 B。SDS…聚丙烯酰胺凝胶电泳 C。紫外分光光度法 D。超速离心 答案：B、D 考点：蛋白质的分离纯化常用的几种方法的应用 解析：A只可分离纯化蛋白质，但是不能测定分子量，C。可测蛋白质含量，B、D都是利用 蛋白质分子量的差异分离纯化蛋白质的方法，故可用于测定蛋白质分子量。 十七、丙二酸对于琥珀酸脱氢酶的影响属于（）（2000北医） A。反馈抑制B。作用物抑制 C。竞争性抑制D。非竞争性抑制 E。反竞争性抑制 答案：C 考点：抑制剂对酶促反应速度的影响 解析；丙二酸与琥珀酸结构相似，其与酶的亲和力远大于琥珀酸与酶的亲和力，其对琥珀酸 脱氢酶的抑制作用是竞争性抑制的典型实例。 十八、同工酶（）（2000北医） A。催化的化学反应相同 B。酶蛋白的分子结构相同 C。酶蛋白的理化性质相同D。电泳行为相同 E。Km值相同 答案：A 考点：同工酶的定义、性质
解析：同工酶分子结构、理化性质、Km值皆不同，但催化同一化学反应 十九、不直接参与维系蛋白质三级结构的化学键是（）（2000北医） A。氢键B。盐键 C。疏水键D。二硫键 E。肽键 答案：E 考点：蛋白质各级结构中主要的化学键。 解析：肽键是蛋白质一级结构的主要化学键，直接维系三级结构的是各种次级键——氢键、 盐键、疏水键、二硫键，其中疏水键是主要的键。 二十、用高聚脱氧胸苷酸纤维素（oligo…dT纤维素）分离纯化mRMA的层析方法称（）（1994 北医） A。离子交换层析 B。排阻层析 C。亲和层析 D。反相层析 E。高效液相层析 答案：C 考点：层析技术的类别及原理 解析：层析是利用各组分理化性质的不同，使各组分以不同程度分布在两相中，当流动相流 过固定相时，各组分以不同速度移动，而达到分离，根据两相相互作用的原理的不同分为不 同的类型：如离子交换层析是指流动相可与固定相因带电荷性质不同而结合，而亲和层析是 指流动相与固定相具有专一而又可逆的亲和力而使生物分子分离，本题中oligo…dT纤维素 可与mRNA的多聚腺苷酸尾碱基配对结合，故属亲和层析。 填空 一、在假尿苷中，碱基和核糖是以键相连的（1995北医） 答案：杂环上的C…5与糖环的C…1′ 考点：tRNA分子和稀有碱基 解析：要记住 tRNA 转录后加工各种稀有碱基的生成原理，如一般的嘧啶核苷是以杂环上 N…1 与糖环的C…1′连成糖苷键，这正是与假尿嘧啶核苷的区别。 二、别构酶都含有和两种结构或亚基（1995北医） 答案：调节部位催化部位 考点：别构酶的定义、结构 解析：酶的两种最主要的活性调节方式：变构调节与共价修饰调节，要记住相应的调节原理 三、可以按蛋白质的分子量、电荷及构象分离蛋白质的方法是（1995北医） 答案：电泳 考点：蛋白质的性质及分离纯化方法 解析：蛋白质分离纯化方法是蛋白质一章中很重要的部分，最好结合蛋白质的理化性质来记 忆，因为其分离纯化采用的方法是由其相应的性质决定的。 四、位于酶活性中心的必需基团有和（1995北医） 答案：催化基团和结合基团 考点：酶的分子结构 解析：酶的活性中心结构要记住，因为这是酶发生催化作用的基础，也便于对酶促反应机制 的理解。 五、蛋白质变性时，其溶液粘度溶解度（1999北医） 答案：增加，降低 考点：蛋白质的理化性质
解析：蛋白质变性主要发生二硫键和非共价键的破坏，变性后其理化性质改变，生物活性丧 失。 六、反竞争性抑制物存在时，酶反应动力学特点，Km（1999北医） 答案：降低、减小 考点：抑制剂对酶促反应速度的影响 解析：竞争性抑制Km增大Vm不变 非竞争性抑制Km不变Vm降低 反竞争性抑制Km减小Vm降低 七、目前常用的蛋白质序列分析法有和，可直接测量蛋白质分子空间结构的方法是（1996 北医） 答案：多肽链氨基酸序列分析，快速DNA序列分析，X射线晶体衍射法 考点：蛋白质一级结构和空间结构的测定 解析；蛋白质一级结构测定方法中，通过氨基酸的自动连续切除和鉴定是常用的方法，但不 是唯一的办法，还可以先分离编码蛋白质的基因，再测定DNA序列，按照三联密码原则推 断出氨基酸序列。两项技术还可以补充互用。 八、实验测得 Tyr 的 pK1＝2。20，pK2＝9。11，pKR＝10。07，Tyr 的 pI 应为。（1996 北医） 答案：5。66 考点：氨基酸等电点的计算 解析：写出Tyr（酪氨酸）的电离式，可以看出其兼性离子两边的pK值分别是pK1、pK2与 pKR 无关，故其pI＝1〖〗2（pK1＋pK2）＝1〖〗2（2。20＋9。11）＝5。66 九、琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂为和。（1996北医） 答案：丙二酸、戊二酸 考点：抑制剂对酶促反应速度的影响 解析：丙二酸、戊二酸与琥珀酸结构类似，所以可以与琥珀酸竞争酶的结合部位，发挥竞争 性抑制的作用。 十、蛋白质和核酸对紫外光均有吸收，蛋白质的最大吸收波长为nm，核酸是nm（2000北 医） 答案：280、260 考点：蛋白质、核酸的理化性质 解析：蛋白质最大吸收峰是因其含有酪氨酸、色氨酸残基，核酸是因其嘌呤、嘧啶环中有共 轭双键。 十一、蛋白质变性时一级结构不变，蛋白质一级结构是指氨基酸的排列顺序而言（1992） 十二、Km值是指酶促反应速度达最大反应速度一半时的底物浓度（1990） 十三、酶结构的调节包括变构调节和共价修饰调节（1994） 十四、就化学本质而言，酶原的激活过程就是酶的活性中心形成或暴露的过程（1993） 十五、一定条件下，核酸分子 Tm
